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                  通蔚實業(yè)ELISA試劑盒分析葉綠素含量測定步驟
                  更新時間:2017-12-18   點擊次數(shù):2164次

                  葉綠素(chlorophyll)是一類與光合作用(photosynthesis)有關(guān)的zui重要的色素。光合作用是通過合成一些有機化合物將光能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能的過程。葉綠素實際上存在于所有能營造光合作用的生物體,包括綠色植物、原核的藍綠藻(藍菌)和真核的藻類。葉綠素從光中吸收能量,然后能量被用來將二氧化碳轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔铩?br />原理
                  根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收,利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度,即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位,液層厚度為1cm時,α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì),則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A,并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾,所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的zui大吸收峰。
                  材料、儀器設(shè)備及試劑
                  材料:新鮮(或烘干)的植物葉片。
                  儀器設(shè)備:
                  1. 分光光度計
                  2. 電子頂載天平(感量0.01g)
                  3. 研缽
                  4. 棕色容量瓶
                  5. 小漏斗
                  6. 定量濾紙
                  7. 吸水紙
                  8. 擦境紙
                  9. 滴管

                  試劑:
                  96%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸鈣粉。

                  實驗步驟
                  1. 取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,剪碎(去掉中脈),混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。3. 取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次,zui后連同殘渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。zui后用乙醇定容至25ml,搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95%乙醇為空白,在波長665nm、649nm下測定吸光度。

                  實驗結(jié)果計算
                  將測定得到的吸光值代入下面的式子:Ca=13.9665-6.88A649;Cb=24.96A649-7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(Ca、Cb:mg/L),二者之和為總?cè)~綠素的濃度。zui后根據(jù)下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量:
                  葉綠素的含量(mg/g)= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重(或干重)。
                   

                  上海通蔚生物科技有限公司

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                  地址:上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號3463室

                  主營產(chǎn)品:ELISA檢測試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,兔ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,鴨ELISA試劑盒

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