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 人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識

Elisa試驗(yàn)中我們會注意到Elisa試劑盒說明書上寫到封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，那首先了解一下蔗糖封閉的原理：
1、Elisa實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒有封閉作用。
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)Elisa板子吸附（包被）的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在Elisa板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理。
至于哪一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證，但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳（市售即可），0.4%的明膠，但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時(shí)候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。
tween的作用：雖然不能單獨(dú)封閉，但和BSA在封閉時(shí)會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
附件：Elisa實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置
Elisa實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)， 人ELISA試劑盒 簡單介紹一下Elisa試劑以及各種溶液的配置方法：（1）　Elisa實(shí)驗(yàn)包被緩沖液；（2）　Elisa實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液； （3）　Elisa實(shí)驗(yàn)稀釋液;（4）Elisa實(shí)驗(yàn)終止液；（5）Elisa底物緩沖液；（6）Elisa實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液；（7）　Elisa實(shí)驗(yàn)ABTS使用液；（8）ELISC。

ELISA試驗(yàn)中的試劑
（1）　Elisa實(shí)驗(yàn)包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaHCO3 1.59克
NaHCO3　 2.93克
加蒸餾水至1000ml
（2）　Elisa實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M
KH2PO4 　　　　 　0.2克
Na2HPO4·12H2O　　2.9克
NaCl　　　　　 　　8.0克
KCl　　　　　　　 　0.2克
Tween-20　0.05%　 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
（3）　Elisa實(shí)驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
（4）　Elisa實(shí)驗(yàn)終止液（2M　H2SO4）：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。
（5）　Elisa底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:
0.2M Na2HPO4（28.4克/L） 25.7ml
0.1M 檸檬酸（19.2克/L）　　　　　 24.3ml
加蒸餾水50ml。
（6）　Elisa實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:
TMB（10mg/5ml無水乙醇） 0.5ml
底物緩沖液（PH5.5）　　　 10ml
0.75%H2O2 32μl
（7）　Elisa實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:
ABTS　　　　　　　　0.5mg
底物緩沖液（PH5.5）　 1ml
3%H2O2 2μl
（8）Elisa實(shí)驗(yàn)封閉液：
 人ELISA試劑盒牛血清白蛋白（BSA） 5克
加洗滌緩沖液至100ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。
為了保證Elisa實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。