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豚鼠白細(xì)胞介素-25ELISA 檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春，儀征

　　　　　　　　　　本試劑僅供研究使用      標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
　　　　IL-25試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知IL-25濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IL-25和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-25的濃度呈比例關(guān)系。
　　　　
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗IL-25抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

豚鼠白細(xì)胞介素-25ELISA 檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春，儀征

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

豚鼠白細(xì)胞介素-25ELISA 檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春，儀征

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

豚鼠白細(xì)胞介素-25ELISA 檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春，儀征

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-25標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-25含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/mlHEPPSO, sodium salt N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-羥基丙磺酸鈉鹽 [89648-37-3] 25g
HEPPSO, sodium salt N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-羥基丙磺酸鈉鹽 [89648-37-3] 100g
Heptane 正庚烷 [142-82-5] 250ml
n-Heptanoic acid 正庚酸 [111-14-8] 250ml
n-Heptyl β-D-glucopyranoside 正庚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷 [78617-12-6] 1g
Hesperidin 橙皮甙 [520-26-3] 50mg
Hexachloroethane 六氯乙烷 [67-72-1] 250g
1-Hexadecanoic acid 十六酸 [57-10-3] 250g
1-Hexadecanol 十六醇 [36653-82-4] 1kg
 

豚鼠白細(xì)胞介素-25ELISA 檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春，儀征

Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 25g
Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 100g
Hexamethylenetetramine 六次甲基四胺 [100-97-0] 500g
Hexamethylphosphoramide 六甲基磷酰三胺 [680-31-9] 100g
Hexammine cobalt（III） chloride 三氯六氨絡(luò)鈷 [10534-89-1] 1g
Hexammine cobalt（III） chloride 三氯六氨絡(luò)鈷 [10534-89-1] 5g
1,6-Hexanediamine 1,6-己二胺 [124-09-4] 500g
1,6-Hexanediol 1,6-己二醇 [629-11-8] 100g
1-Hexanesulfonic acid, sodium salt 1-已烷磺酸鈉 [2832-45-3] 5g
n-Hexanol 正己醇 [111-27-3] 5ml
Hexokinase （Grade I） 己糖激酶 [9001-51-8] 500U
Hexylene glycol 己二醇 [107-41-5] 500ml
Hexyl-beta-D-maltoside 正己基--beta-D-麥牙糖苷 [870287-95-9] 1g
Hippuric acid 馬尿酸 [495-69-2] 25g
Histamine 組胺 [51-45-6] 1g
Histamine 組胺 [51-45-6] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 25g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 5g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 25g
DL-Histidine DL-組氨酸 [4998-57-6] 50g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 100g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 500g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 25g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 100g
Histochoice® mounting media 組織切片清除劑 / 100ml
Histones , dried 組蛋白A / 250mg
Histones , dried 組蛋白A / 1g
Histone 組蛋白 / 250mg
Phospho-Stat2 （Tyr690）  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體
phospho-STAT3 （Ser727）  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體
Aromatase （Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase） 芳香化酶抗體
Aromatase （Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase） 芳香化酶抗體
human CD8 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標(biāo)記的抗人CD8單抗
human CD14 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標(biāo)記的抗人CD14 單抗
Aromatase （Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase） 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
Aromatase （Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase） 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
ACV-A（Activin A） 活化素A抗體
ACV-A（Activin A） 活化素A抗體
COX（Cytochrome C Oxidase） 細(xì)胞色素c氧化酶抗體
ARIP2a（Activin receptor 2A） 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體
phospho-STAT6（Tyr641）  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體
Phospho-Stat4 （Tyr693）  磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體
phospho-STMN2/SCG10 （Ser50）  磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白SCG10抗體
ARIP2a（Activin receptor 2A） 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體
Rabbit human IgGF（ab'）2 Whole serum 兔抗人IgGF（ab'）2抗血清
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清